一、技術原理

　　酶標儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的專用儀器。它基于光電比色法或熒光檢測法，通過測量樣本對特定波長光的吸收程度或熒光信號強度，實現(xiàn)對生物樣本中待測物的定性和定量分析。

　　(一)光電比色法原理

　　酶標儀的光源燈發(fā)出的光波經過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔板中的待測標本。單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上。光電檢測器將這些光信號轉換成相應的電信號，經過一系列信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算，最后由顯示器和打印機顯示結果。特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系，檢測單位用OD值(光密度)表示，OD值與光強度之間的關系遵循Bouger-amberT-beer法則。

　　(二)熒光檢測法原理

　　在熒光檢測中，酶標儀通過特定波長的激發(fā)光照射樣本，使樣本中的熒光物質發(fā)出熒光。光電檢測器接收熒光信號并將其轉換為電信號，經過處理后得到熒光強度值，該值與樣本中熒光物質的濃度成正比。

　　(三)波長選擇與雙波長檢測

　　在測定檢測物時，選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。但每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，再選取一個參照波長。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。例如，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定最-常用的，考慮到雙波長比色的需要，還應有630nm和405nm波長的濾光片。

　　二、操作指南

　　(一)準備工作

　　儀器放置：將酶標儀、配套的電腦及主機等放在平穩(wěn)、干燥的地方。

　　電源連接與預熱：將酶標儀與電腦連機，依次打開電腦和酶標儀的開關，等待自檢，預熱5 - 30分鐘(不同型號儀器預熱時間可能不同)，使儀器達到穩(wěn)定狀態(tài)。在預熱過程中，可根據(jù)具體情況設置所需要的波長和光線強度。

　　軟件啟動與程序設置：打開與儀器配套的軟件，建立新的檢測程序或打開已有程序。創(chuàng)建新程序時，選擇所需創(chuàng)建的程序協(xié)議，如吸光值、化學發(fā)光、熒光強度等;選定試驗協(xié)議后，進行波長選定、酶標板選定，并設置protocol參數(shù)，如酶標板震蕩混勻樣品的時間、測量樣品結果的時間、樣品波長掃描范圍以及樣品環(huán)境溫度等。修改已有程序時，在酶標儀打開界面中選定一個protocol，然后雙擊進入程序設置界面進行相應修改。

　　(二)樣品準備

　　樣品制備與稀釋：根據(jù)實驗要求，準備好待檢測的樣品和標準品，并進行相應的稀釋和加樣。同時，應控制好稀釋倍數(shù)，避免樣品濃度過高或過低的影響。

　　微孔板布置：在酶標板中按照實驗設計布置待測和標準樣品，每個孔位加入適量的稀釋后的樣品。同時，在同一板中添加對照組和空白對照。

　　(三)試劑添加

　　根據(jù)實驗需求加入輔助試劑，如底物和酶標記等。加入試劑時需要嚴格按照實驗流程進行，按照正確的順序和比例加入試劑，避免污染和誤差。

　　(四)混勻和孵育

　　輕輕搖晃或輕輕拍打酶標儀板，確保樣品和試劑充分混合。將酶標儀板放置在恒溫條件下的孵化箱中進行相應的孵育時間，以促進反應的進行。

　　(五)反應停止和讀數(shù)

　　反應停止：在孵育結束后，根據(jù)試劑盒說明書中的指導，加入適當?shù)姆磻Ｖ箘?，終止反應。

　　讀數(shù)操作：將酶標儀板放置在酶標儀中，根據(jù)所測定的具體物質選擇相應的波長或濾光片，讀取吸光度或熒光強度值。

　　(六)數(shù)據(jù)處理

　　根據(jù)實驗需要，使用軟件或計算公式將讀數(shù)結果轉化為所需的具體物質的濃度或活性。點擊電腦軟件上的“編輯"欄中的“復制到Excel"，導出數(shù)據(jù)后進行數(shù)據(jù)處理和分析。

　　(七)儀器清理與維護

　　取出酶標板：數(shù)據(jù)處理完成后，打開儀器蓋，取出酶標板。

　　儀器清潔：蓋好儀器蓋，關閉酶標儀電源，并將儀器擦拭干凈。

　　定期維護：按照設備的維護手冊，定期進行維護和檢修工作，包括校準和更換部件等。定期檢查儀器狀態(tài)，如光源是否正常、濾光片是否清潔等;儀器出現(xiàn)故障時，應及時聯(lián)系專業(yè)工程師進行維修，避免盲目自行設置。